Estudio de la expresión del receptor LAIR-1 en macrófagos humanos. Posible implicación en el desarrollo de cirrosis hepática

http://congresos.um.es/iiefb/iiefb2013/paper/viewFile/27511/12531

TEMA	ESTUDIO  DE  LA  EXPRESIÓN  DEL  RECEPTOR  LAIR-1  EN  MACRÓFAGOS  HUMANOS.  POSIBLE  IMPLICACIÓN  EN  EL  DESARROLLO  DE  CIRROSIS HEPÁTICA.
OBJETIVOS	Estudiar la expresión del gen LAIR-1 mediante qRT-PCR en macrófagos peritoneales  obtenidos  del  líquido  ascítico  de  pacientes  con  cirrosis  hepática,  y  su  comparación  con  los  obtenidos  para  macrófagos  de  sangre  periférica  de  donantes  sanos,  como  población  de  referencia.
MUESTRA	·         Macrófagos peritoneales  obtenidos  del  líquido  ascítico en paciente con cirrosis hepática. ·         Macrófagos  de  sangre  periférica  de  donantes  sanos. (ARN)
EX AN.	MACRÓFAGOS PERITONEALES  OBTENIDOS  DEL  LÍQUIDO  ASCÍTICO:  LISIS.- Física centrifugación del LA a 1500 rpm. SEPARACIÓN.-  Las células  obtenidas  del  LA  fueron  lavadas  en  tampón  fosfato  salino  (PBS)  y resuspendidas en DMEM +glutaMAX (GIBCO Invitrogen, Paisley, UK) suplementado con un 10%  de suero de ternera fetal (STF) previamente descomplementado por calentamiento a 56º C durante 30 minutos y con 50 U/ml de penicilina y 50 g/ml de estreptomicina. PURIFICACIÓN.- Tras  incubación  durante  la  noche  a  37ºC,  las  células  fueron lavadas  con  MCC  para  eliminar  aquellas  células  no  adherentes,  quedándonos  así  sólo  con  la fracción de macrófagos que han quedado adheridos al fondo del pocillo. La pureza de M-DM en los cultivos celulares fue mayor al 95%. MACRÓFAGOS  DE  SANGRE  PERIFÉRICA : Estas muestras fueron donadas previo descarte por el Centro al no alcanzar el peso óptimo necesario para su uso, y su extracción no se realizó en ningún caso para obtener muestras de estudio. SEPARACIÓN.- Ésta  se  realizó  mediante  centrifugación  a temperatura  ambiente  a  2000  rpm  durante  20  minutos  sin  freno. PURIFICACIÓN.- Tras incubación durante 24h, las células fueron lavadas con MCC como en el apartado anterior.
GEN AMPLIFICADO	LAIR-Fa (forward)      104pb LAIR-R (reverse)        104pb LAIR-Fb (forward)    54pb LAIR-R (reverse)       54pb GAPDH-F (forward)     100pb GAPDH-R (reverse)     100pb
PCR	TIPO: Qrt-PCR              ºC        T                   # D         95        15seg H         60        1min        ] 40 ciclos E          95         15 seg
VISUALIZACIÓN	Se visualizaron tras tinción con bromuro de etidio en un transiluminador de luz ultravioleta. EFO

PRUEBAS DE TAMIZAJE Y CONFIRMATORIAS DE LA CIRROSIS HEPÁTICA

PRUEBAS DE TAMIZAJE

*Existen biomarcadores con los cuales se pretenden comprobar el avance o regresión de la fibrosis hepática; como la medición de algunas proteínas como a2, macroglobulinas, apo-A7, hepatoglobina, ácido hialurónico y otras enzimas hepáticas. Esta prueba tiene algunas desventajas; por su costo, disponibilidad y heterogeneidad de las mismas.

*Por elastografía en la cual se analiza las características físicas del hígado (elasticidad y rigidez).

*Ecografìas, TACs

PRUEBAS CONFIRMATORIAS

*Aún se está en busca de un diagnóstico no invasivo y  exacto que permita validar la progresión o regresión de la fibrosis hepática, el mejor "estándar" hasta la fecha es la BIOPSIA HEPÁTICA (BH), la cual posee algunas desventajas ya que al ser invasiva se corre riesgos y con una mortalidad de 1 en 100000, y además la sensibilidad de error oscila entre el 33% y 50%.

FUENTE

http://www.scielo.org.co/scielo.php?pid=S0120-99572010000200011&script=sci_arttext

http://medicinadepostgrado.com/infopoems/gastroenterologia/consulta/cirrosis.htm

ALTERACIONES EN LA TRADUCCIÓN

ESTUDIO DE LA EXPRESIÓN DEL RECEPTOR LAIR-1 EN MACRÓFAGOS HUMANOS. POSIBLE IMPLICACIÓN EN EL DESARROLLO DE CIRROSIS HEPÁTICA

La cirrosis hepática es una enfermedad asociada al incremento de mediadores inflamatorios ya que es una infección persistente al tejido hepático. Las células del sistema inminitario tienen un papel crucial y una actividad constante, pero al mismo tiempo si su "uso" es exagerado, resulta dañino frente al huésped; y por ésta razón existe mecanismos de regulación de la respuesta inmunitaria por medio de RECEPTORES INHIBIDORES, los cuales se caracterizan por tener una secuencia intracitoplasmática denominada ITIM , las cuales reclutan fosfatasa, mediante proteínas como SHP-1, SHP-2 Y SHIP) y así producirán la inhibición celular.

Uno de éstos receptores inhibidores  es LAIR-1 (Leukocyte- associate immunoglobuline recepetor 1), de ésta manera a la cirrosis se le ha asociado con un fallo en el gen que codifica este receptor y mediante qRT-PCR se demostró que la cantidad de de LAIR-1 en macrófagos  en líquido ascítico de pacientes enfermos es menor que la cantidad de macrófagos en la sangre periférica de pacientes sanos, dando por sentado una posible terapia para ésta enfermedad. 

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ALTERACIONES EN LA TRANSCRIPCIÓN DEL ADN

Un factor de transcripción protege al hígado del alcohol y la hepatitis

Hace menos de dos años, investigadores de The American Journal of Pathology, pusieron hincapié en buscar la razón de que un porcentaje de la gente que consume alcohol en exceso no padece de cirrosis hepática; y la respuesta se encontró en el factor de transcripción FOXO3 que activado por el alcohol actúa como protección contra lesiones hepáticas; ya que tiene una función citoprotectora o citotóxica.

El problema radica en que si el alcohol y el virus de la hepatitis C se combinan, éste factor FOXO3 se suprime y las lesiones hepáticas empeorarán.

http://www.univadis.com.ec/medical-news/53/Un-factor-de-transcripcion-protege-al-higado-del-alcohol-y-la-hepatitis

ALTERACIONES EPIGENÓMICAS DE LA CIRROSIS

EPIGENÉTICA Y CARCINOMA HEPATOCELULAR

Éstas lesiones epigenéticas ocurren por cambios en la metilación del ADN, lugares especícficos de hipermetilación de ADN, disfunción en la modificación de Histonas y una expreseión anormal de ncARNs.

En el ADN combinado se identificó 230 genes, cuyos promotores fueron hipometilados y tienen una elevada expresión de HCC, y 322 genes que gueron hipermetilados pero con baja expresión de tumores.

Los virus pueden ser un facotir importante para que exista una relación entre epigenética y tumores. La proteína oncogégina HBX de HBV induce a la expresión de DNMT1, 3a y 3b para la simulación de una hipermetilación de IGFBP y p16 INK  y con ésto producir también una hipometilación.

http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/hep.27131/full