Estudio de la expresión del receptor LAIR-1 en macrófagos humanos. Posible implicación en el desarrollo de cirrosis hepática

http://congresos.um.es/iiefb/iiefb2013/paper/viewFile/27511/12531

TEMA	ESTUDIO  DE  LA  EXPRESIÓN  DEL  RECEPTOR  LAIR-1  EN  MACRÓFAGOS  HUMANOS.  POSIBLE  IMPLICACIÓN  EN  EL  DESARROLLO  DE  CIRROSIS HEPÁTICA.
OBJETIVOS	Estudiar la expresión del gen LAIR-1 mediante qRT-PCR en macrófagos peritoneales  obtenidos  del  líquido  ascítico  de  pacientes  con  cirrosis  hepática,  y  su  comparación  con  los  obtenidos  para  macrófagos  de  sangre  periférica  de  donantes  sanos,  como  población  de  referencia.
MUESTRA	·         Macrófagos peritoneales  obtenidos  del  líquido  ascítico en paciente con cirrosis hepática. ·         Macrófagos  de  sangre  periférica  de  donantes  sanos. (ARN)
EX AN.	MACRÓFAGOS PERITONEALES  OBTENIDOS  DEL  LÍQUIDO  ASCÍTICO:  LISIS.- Física centrifugación del LA a 1500 rpm. SEPARACIÓN.-  Las células  obtenidas  del  LA  fueron  lavadas  en  tampón  fosfato  salino  (PBS)  y resuspendidas en DMEM +glutaMAX (GIBCO Invitrogen, Paisley, UK) suplementado con un 10%  de suero de ternera fetal (STF) previamente descomplementado por calentamiento a 56º C durante 30 minutos y con 50 U/ml de penicilina y 50 g/ml de estreptomicina. PURIFICACIÓN.- Tras  incubación  durante  la  noche  a  37ºC,  las  células  fueron lavadas  con  MCC  para  eliminar  aquellas  células  no  adherentes,  quedándonos  así  sólo  con  la fracción de macrófagos que han quedado adheridos al fondo del pocillo. La pureza de M-DM en los cultivos celulares fue mayor al 95%. MACRÓFAGOS  DE  SANGRE  PERIFÉRICA : Estas muestras fueron donadas previo descarte por el Centro al no alcanzar el peso óptimo necesario para su uso, y su extracción no se realizó en ningún caso para obtener muestras de estudio. SEPARACIÓN.- Ésta  se  realizó  mediante  centrifugación  a temperatura  ambiente  a  2000  rpm  durante  20  minutos  sin  freno. PURIFICACIÓN.- Tras incubación durante 24h, las células fueron lavadas con MCC como en el apartado anterior.
GEN AMPLIFICADO	LAIR-Fa (forward)      104pb LAIR-R (reverse)        104pb LAIR-Fb (forward)    54pb LAIR-R (reverse)       54pb GAPDH-F (forward)     100pb GAPDH-R (reverse)     100pb
PCR	TIPO: Qrt-PCR              ºC        T                   # D         95        15seg H         60        1min        ] 40 ciclos E          95         15 seg
VISUALIZACIÓN	Se visualizaron tras tinción con bromuro de etidio en un transiluminador de luz ultravioleta. EFO